Biotin-C5-Mal（生物素-C5-馬來酰亞胺）是一種結合生物素與馬來酰亞胺基團的化學試劑，其核心特性與應用如下：

一、化學結構與特性

1. 組成

• 生物素（Biotin）：與親和素/鏈霉親和素高親和力結合（Kd≈10?1? M），用于靶向定位。

• C5連接臂：含5個亞甲基的柔性鏈，減少空間位阻，避免生物素與馬來酰亞胺基團相互干擾，提升標記效率。

• 馬來酰亞胺（Maleimide）：與含巰基（-SH）的分子（如半胱氨酸殘基）發生特異性邁克爾加成反應，形成穩定共價鍵。

2. 物理性質

• 外觀：白色至類白色粉末。

• 溶解性：溶于大部分有機溶劑（如DMSO、DMF），在含少量助溶劑的水性緩沖液（pH 6.5-7.5）中部分溶解。

• 穩定性：馬來酰亞胺基團易水解，需避光、密封儲存于-20℃干燥環境，溶解后應立即使用。

二、核心功能與應用

1. 特異性標記含巰基生物分子

• 蛋白質標記：通過與半胱氨酸殘基反應，將生物素引入目標蛋白，便于后續分離、純化及檢測（如Western blot、ELISA）。

• 抗體修飾：標記治療性抗體的游離巰基，減少生物素對抗原結合位點的空間遮擋，保持抗體活性，助力抗體藥物偶聯物（ADC）研發。

• 酶標記：標記含巰基的酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶），減少對酶活性中心的影響，提升酶聯免疫檢測靈敏度。

2. 蛋白質相互作用研究

• 標記目標蛋白后，利用C5連接臂的靈活性，使生物素更易與親和素結合，提高相互作用蛋白的捕獲效率，且不影響蛋白間結合作用。

3. 細胞表面標記與成像

• 標記細胞表面標志物（如受體、抗原），實現細胞分選、成像及功能分析（如流式細胞術、熒光顯微鏡觀察）。

4. 藥物遞送系統

• 通過生物素與親和素的特異性結合，實現藥物的靶向輸送和控釋。

5. 熒光探針與硫醇分析

• 馬來酰亞胺基團具有熒光猝滅能力，可作為熒光探針特異性檢測硫醇分析物（如谷胱甘肽）。

三、特點與注意事項

1. 特點

• 高特異性：僅與游離巰基反應，減少非特異性結合。

• 高穩定性：標記產物共價鍵穩定，實驗條件下不易解離。

• 靈活性：C5連接臂降低空間位阻，提升標記效率及后續親和結合效率。

2. 注意事項

• 儲存條件：需嚴格避光、密封，儲存于-20℃干燥環境，避免頻繁解凍。

• 反應條件：在pH 6.5-7.5的緩沖液中進行反應，避免含巰基的緩沖液（如Tris）。

• 操作速度：溶解后應立即使用，防止馬來酰亞胺基團水解失效。

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