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二氧化鈦磁珠的用途有哪些呢

2025-11-05 [34]

二氧化鈦磁珠(1μm)是一種專有的磁性材料微粒載體,其核心用途集中在磷酸化肽富集外泌體分離兩大領域,具體應用場景及優勢如下:

一、磷酸化肽富集:蛋白質組學研究的關鍵工具

  1. 作用機制
    二氧化鈦(TiO?)對磷酸絲氨酸(pSer)、磷酸蘇氨酸(pThr)和磷酸酪氨酸(pTyr)殘基具有選擇性親和力,能高效富集復雜生物樣品(如細胞裂解液、組織提取物)中的磷酸化肽。其表面納米粒子對單磷酸化肽和多磷酸化肽無偏好,適合單步富集用于質譜分析。

  2. 操作優勢

    • 高特異性:與磷酸化肽的親和力遠高于非磷酸化肽,減少背景干擾。

    • 高重復性:磁珠表面結構均一,確保實驗結果一致性。

    • 快速磁響應:磁響應時間<30秒,減少樣品損失,適配自動化操作。

    • 化學兼容性:厚殼層磁珠耐受強酸、強堿,適用于化學環境。

  3. 典型流程

    • 平衡磁珠:用上樣緩沖液(如1M羥基乙酸、80%乙腈、5%三氟yi酸,pH 2.5-3.0)洗滌磁珠。

    • 結合目標肽:將消化后的蛋白樣品與磁珠混合,室溫孵育20-30分鐘。

    • 洗滌去除非特異性結合:用洗滌緩沖液(如80%乙腈、1%三氟yi酸)清洗磁珠。

    • 洗脫與收集:用洗脫緩沖液(如1%氫氧化銨)洗脫磷酸化肽,酸化后進行質譜分析。

  4. 應用案例

    • 基礎研究:從細胞裂解液中富集磷酸化肽,揭示磷酸化修飾位點及動態變化。

    • 臨床研究:分析疾病樣本中的磷酸化蛋白標志物。

二、外泌體分離:疾病診斷與生物標志物發現的新方法

  1. 作用機制
    TiO?磁珠通過與外泌體磷脂雙分子層的磷酸基形成雙齒結構,特異性捕獲外泌體;磁性內核支持快速分離,堿性溶液洗脫后可回收完整外泌體。

  2. 操作優勢

    • 高回收率:從100mL血漿中提取約10?個外泌體,回收率達80%。

    • 高純度:白蛋白等污染物含量顯著低于超速離心法。

    • 快速分離:整個過程<20分鐘,遠快于傳統超速離心法(8-10小時)。

    • 結構完整性:洗脫的外泌體可直接用于下游分析(如透射電鏡、蛋白質印記)。

  3. 典型流程

    • 結合外泌體:將血漿樣本與磁珠混合,室溫孵育使磁珠捕獲外泌體。

    • 磁分離:用磁分離器去除未結合成分,保留磁珠-外泌體復合物。

    • 洗脫與收集:用堿性溶液洗脫外泌體,中和后進行下游分析。


三、其他潛在應用

  • 糖肽富集:TiO?對糖基化殘基的親和力使其可用于糖肽選擇性富集。

  • 核酸提取:部分磁珠通過表面修飾實現核酸高通量、自動化提取。

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