CY5標記單層Ti?C?T?的制備方法主要分為共價偶聯法和非共價作用法兩大類，具體如下：

一、共價偶聯法

共價偶聯法通過化學鍵將CY5與單層Ti?C?T?結合，形成穩定的標記結構。具體步驟如下：

1. 表面氨基化修飾：
   使用硅烷化試劑（如APTES）對單層Ti?C?T?進行表面修飾，引入氨基（-NH?）基團。這一步驟為后續與CY5的異硫氰酸酯基團（-NCS）反應提供活性位點。

2. CY5異硫氰酸酯反應：
   將修飾后的Ti?C?T?與CY5異硫氰酸酯（RITC）反應，氨基與異硫氰酸酯基團形成共價鍵，實現CY5的標記。

3. EDC/NHS介導的偶聯反應：
   另一種方法是利用EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺）和NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）活化Ti?C?T?表面的羥基（-OH），使其與CY5的羧基（-COOH）直接偶聯，形成穩定的酰胺鍵。

二、非共價作用法

非共價作用法利用物理相互作用（如靜電吸附、π-π堆積、氫鍵等）實現CY5與單層Ti?C?T?的結合。具體方法包括：

1. 靜電吸附：
   單層Ti?C?T?表面因終止基團（-F、-OH等）帶負電，可通過靜電作用吸附帶正電的CY5衍生物（如CY5-NH?）。

2. 層間插入：
   利用Ti?C?T?的層狀結構，通過超聲或攪拌使CY5分子插入層間，形成穩定的復合物。

3. π-π堆積與氫鍵作用：
   CY5分子中的芳香環與Ti?C?T?表面的共軛結構通過π-π堆積作用結合，同時羥基等官能團可形成氫鍵，增強標記穩定性。

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