Biotin-4-fluorescein（生物素-4-熒光素）是一種結合生物素（Biotin）與熒光素（Fluorescein）的生物共軛物，其分子式為 C??H??N?O?S，分子量為 644.69 g/mol，外觀呈橙色粉末狀，可溶于二甲基亞砜（DMSO）、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等有機溶劑。

一、核心特性

1. 雙功能標記

• 生物素端：與親和素（如鏈霉親和素）結合力較強（結合常數Kd～10?1? M），可實現靶向捕獲或富集。

• 熒光素端：激發波長為 492 nm，發射波長為 518 nm，熒光信號強且穩定，適用于熒光顯微鏡、流式細胞術等檢測技術。

2. 高靈敏度與特異性

• 與親和素結合時，熒光信號可被特異性淬滅（淬滅率達 84-88%），通過熒光恢復或強度變化實現定量檢測。

• 適用于復雜樣本中低豐度目標的檢測，如細胞表面標記物、稀疏核酸序列等。

3. 小分子優勢

• 相比長鏈生物素衍生物，其分子尺寸更小，減少空間位阻，避免與親和素結合時的抗協同效應，確保結合效率與穩定性。

  
  

結構式：

二、應用方向

1. 分子生物學與生物化學

• 蛋白質標記：標記目標蛋白后，通過親和素系統實現純化、定位或相互作用研究。

• 核酸標記：標記DNA/RNA探針，用于熒光原位雜交（FISH）或實時定量PCR（qPCR）。

• 細胞成像：追蹤細胞內生物素化分子的動態分布，如受體內吞、囊泡運輸等。

2. 診斷與檢測

• 親和素/鏈霉親和素定量：通過熒光淬滅效應，建立均相熒光檢測法，快速測定樣本中親和素濃度。

• 生物素衍生物檢測：作為標準品或探針，檢測生物素化分子（如生物素化抗體、藥物載體）的含量。

3. 藥物研發與納米技術

• 靶向遞送：修飾藥物載體（如脂質體、納米顆粒）表面，通過生物素-親和素系統實現靶向釋放。

• 納米材料功能化：標記納米顆粒后，利用熒光信號追蹤其體內外行為，優化設計參數。

三、使用注意事項

1. 儲存條件

• 短期保存：4℃冷藏，避光干燥。

• 長期保存：-20℃以下冰凍、干燥、避光，建議充入惰性氣體（如氬氣）保護，防止熒光素降解。

• 有效期：自接收日起 12個月內使用，避免反復凍融。

2. 溶液配制

• 工作液制備：用無水DMSO、DMF或100%甲醇溶解，配制成 1 mM 濃儲液，分裝后冷凍保存。

• 稀釋使用：根據實驗需求，用緩沖液（如PBS）稀釋至工作濃度，避免直接稀釋濃儲液導致沉淀。

3. 實驗操作

• 熒光檢測：使用黑色微孔板（減少背景干擾），設置激發波長 492 nm、發射波長 518 nm、截止波長 500 nm。

• 避免光漂白：檢測過程中盡量縮短光照時間，或使用抗淬滅封片劑。

• pH敏感：反應體系pH應控制在 6.5-7.5，過高或過低會影響生物素-親和素結合效率。

4. 安全提示

• 僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療。

• 操作時佩戴防護手套與護目鏡，避免直接接觸皮膚或吸入粉末。

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